ELISA Kit Operation Video
实验简介:
ELISA (enzyme-linked immunosorbent assay) kits are convenient, rapid and accurate research tool for the detection and quantitation of targeting molecules in samples. Solarbio ELISA kits are used to detect thousands of different proteins and molecules which including cytokines, growth factors and receptors in different species ,such as human, mouse, rat, cow, bovine, horse, equine, sheep, goat, donkey, chicken, duck, porcine, rabbit, dog, canine, monkey, etc. More than 400 ELISA kits are in stock.
实验步骤:
1.ELISA试剂盒检测前准备工作
①ELISA试剂盒信息核对
核对试剂盒外标签信息,例如,试剂盒检测指标中英文是否正确,产品货号是否对应,试剂盒应用次数(16T、48T或96T)是否正确等。
②检查试剂盒组分和试剂盒恢复室温
提前30分钟试剂盒,平衡至室温(18-25℃)。按照说明书检查试剂盒组成主要包括试剂盒组分的名称、数量、规格是否与说明书一致,并仔细阅读试剂盒说明书。
③配制试剂工作液
配制试剂包括标准品工作液配制、洗涤液工作液配制。
2.ELISA试剂盒检测步骤
①包被抗体恢复构像
ELISA试剂盒恢复至室温,加入标准品/样本前,请用洗涤液工作液洗板3次并甩干。
②标准品或样品加样
分别设定标准孔、空白孔和样本孔。标准孔加入100μL倍比稀释的标准品,空白孔加入100μL标准品/样本稀释液,其余孔加入100μL待测样本。给酶标板覆膜,37℃孵育90分钟。
③酶标板洗涤
37℃温箱孵育结束后,取出酶标板,甩尽孔内液体。加入配好的洗涤液工作液,每个反应孔加入250μL 洗涤液,室温静置10-30 s,将洗涤液液弃去,并在无毛絮吸水纸或毛巾进行甩干拍板5-10次。
此步骤,共进行洗板4次。
④生物化抗体稀释及加样
配制生物素化抗体工作液,每孔100μL加入到洗涤好的酶标板中。然后,进行37℃温箱孵育60 min。
⑤酶结合物稀释及加样
孵育完成后,进行与上述相同的洗板操作。配制酶结合物工作液,每孔100μL加入到洗涤好的酶标板中。然后,进行37℃温箱孵育30 min。
⑥显色底物显色
孵育完成后,进行与上述相同的洗板操作。每孔100μL加入TMB显色试剂溶液,加入到洗涤好的酶标板中。然后,进行37℃温箱孵育30 min。
孵育完后,酶标板内溶液由无色变为不同程度的蓝色溶液,里边的显色溶液切记不能弃去。
⑦终止显色
终止反应,取出终止液,每孔50μL加入到显色好的酶标板中。反应孔中溶液颜色由蓝色变为黄色溶液,表明,终止反应正常。
⑧酶标仪读取数据
最后,酶标仪预热后,终止反应5min内进行酶标板反应孔读取反应孔450nm吸光值数据,保存数据并分析,结束ELISA试剂盒实验。