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改良油红O染色液
实验简介:
脂质(Lipid)是中性脂肪、类脂及其衍生物的总称，其共同的物理特性是不溶于水，易溶于有机溶剂(例如乙醇、乙醚等)。中性脂肪染色经常采用苏丹Ⅱ、苏丹Ⅲ、苏丹Ⅳ、苏丹黑B、油红O法等。传统方法中，常采用苏丹染料，最近发现偶氮染料油红O更适合脂肪的染色。油红O是很强的脂溶剂和染脂剂，较易与甘油三脂结合呈小脂滴状），与磷脂结合力稍差。其染色原理一般认为是物理上的溶液作用或吸附作用，借溶液作用使脂肪染色。染料在冰冻切片内脂质的溶解度较在原溶剂中的溶解度更大，所以在染色时染料就从有机溶剂转移入脂质而使脂肪染色。
改良油红O染色液主要用于显示组织器官的脂肪变性和类脂质的异常沉着，常发生于肝、肾、心等实质脏器的脂肪变性，细胞内出现多数中性脂肪滴；鉴别和诊断脂肪组织中所发生的肿瘤及其性质。标本不采用含有乙醇的固定液(如需要固定可采用10%的福尔马林)、也不采用石蜡切片，需用冰冻切片或碳蜡切片。脂肪的阳性染色结果呈橘黄至红色，但具体颜色因脂质浓度而定。
实验步骤:
1.冰冻切片厚度6-10μm，不固定或10%福尔马林固定10min后水洗。
2.切片入蒸馏水中稍冲洗。
3.切片入60%的异丙醇内浸洗20-30s。
4.切片入改良油红O染色液中(加盖)，密闭染色10-15min。
5.分色：入60%的异丙醇内稍洗以便去除染液。
6.入蒸馏水中稍微清洗。
7.Mayer苏木素染色液复染核1-2min。
8.(可选)1%的盐酸溶液稍微分化一下。
9.(可选)自来水漂洗10min或稀碳酸锂溶液中促蓝。
10.入蒸馏水中稍微清洗。
11.用滤纸吸干周围水分。
12.甘油明胶或阿拉伯糖胶封固。
2.切片入蒸馏水中稍冲洗。
3.切片入60%的异丙醇内浸洗20-30s。
4.切片入改良油红O染色液中(加盖)，密闭染色10-15min。
5.分色：入60%的异丙醇内稍洗以便去除染液。
6.入蒸馏水中稍微清洗。
7.Mayer苏木素染色液复染核1-2min。
8.(可选)1%的盐酸溶液稍微分化一下。
9.(可选)自来水漂洗10min或稀碳酸锂溶液中促蓝。
10.入蒸馏水中稍微清洗。
11.用滤纸吸干周围水分。
12.甘油明胶或阿拉伯糖胶封固。
注意事项:
1.改良油红O染色液不够稳定，易产生沉淀，不宜提前配制。
2.如果60%的异丙醇不易获得，亦可采用70%的乙醇。
3.由于脂肪易溶于有机溶剂，所以显示脂肪一般不能像石蜡切片一样处理，而通过冰冻切片染色来显示。
4.作脂肪染色的冰冻切片不可太薄，过薄的切片常会使脂质丢失。
5.Mayer 苏木素染色液复染时间不能过长。
6.染色结果不能长期保存，应尽快观察及照相。
7.甘油明胶封固的样本，保存时间不长。如需长期保存，可以在盖玻片与载玻片交界的边缘用中性树胶封闭。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
2.如果60%的异丙醇不易获得，亦可采用70%的乙醇。
3.由于脂肪易溶于有机溶剂，所以显示脂肪一般不能像石蜡切片一样处理，而通过冰冻切片染色来显示。
4.作脂肪染色的冰冻切片不可太薄，过薄的切片常会使脂质丢失。
5.Mayer 苏木素染色液复染时间不能过长。
6.染色结果不能长期保存，应尽快观察及照相。
7.甘油明胶封固的样本，保存时间不长。如需长期保存，可以在盖玻片与载玻片交界的边缘用中性树胶封闭。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
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