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油红O染色液(细胞专用)
实验简介:
脂质(Lipid)是中性脂肪、类脂及其衍生物的总称，其共同的物理特性是不溶于水，易溶于有机溶剂(如乙醇、乙醚等)。人体的脂肪主要有两种：1、储存脂肪，如中性脂肪，主要分布于皮下、肾、胰腺等部位。2、结构脂肪，如类脂(磷脂、糖脂、胆固醇等)，主要分布于细胞内。中性脂肪(Neutral fat)是由三分子脂肪酸和一分子甘油组成的脂类，呈中性。中性脂肪是储存能量的方式之一，在氧化时释放出能量。中性脂肪染色经常采用苏丹Ⅱ、苏丹Ⅲ、苏丹Ⅳ、苏丹黑B、油红O法等。传统方法采用苏丹染料，最近发现偶氮染料油红O更适合脂肪的染色。油红O是很强的脂溶剂和染脂剂，较易与甘油三脂结合呈小脂滴状，与磷脂结合力稍差，其染色原理一般认为是物理上的溶液作用或吸附作用，借溶液作用使脂肪染色。染料在细胞内脂质的溶解度较原溶剂中的溶解度更大，所以在染色时染料就从有机溶剂转移入脂质而使脂肪染色。
油红O染色液(细胞专用)简称ORO染色液，可显示最小的脂滴，可优先为脂类从溶剂中吸附染料。标本不采用含有乙醇的固定液，如需要固定可采用10%福尔马林)。脂肪阳性染色结果呈橘黄至红色，但具体颜色因脂质浓度而定。
实验步骤:
一、培养细胞
1.移除细胞培养基，用PBS洗两次，加油红O固定液固定20-30min。
2.弃去固定液，用蒸馏水洗2次。
3.加入60%异丙醇浸洗5min。
4.弃去60%异丙醇后加入新配制好的油红O染色液，浸染10-20min。
5.弃去染色液，水洗2-5次，直到无多余染液。
6.加入Mayer苏木素染色液，复染核1-2min。弃去染液后水洗2-5次。
7.入油红O缓冲液 1min，弃去。
8.加入蒸馏水覆盖细胞并在显微镜下观察。
二、细胞涂片
1.制备新鲜骨髓、血液涂片，入油红O固定液固定10-15min。
2.取出涂片，空气中晾干10-15min。
3.入新配制好的油红O染色液，浸染15min。入60%异丙醇漂洗20-30s，流水冲洗，入蒸馏水稍微清洗。
4.入Mayer苏木素染色液，复染核2min。
5.入油红O缓冲液1min。
1.移除细胞培养基，用PBS洗两次，加油红O固定液固定20-30min。
2.弃去固定液，用蒸馏水洗2次。
3.加入60%异丙醇浸洗5min。
4.弃去60%异丙醇后加入新配制好的油红O染色液，浸染10-20min。
5.弃去染色液，水洗2-5次，直到无多余染液。
6.加入Mayer苏木素染色液，复染核1-2min。弃去染液后水洗2-5次。
7.入油红O缓冲液 1min，弃去。
8.加入蒸馏水覆盖细胞并在显微镜下观察。
二、细胞涂片
1.制备新鲜骨髓、血液涂片，入油红O固定液固定10-15min。
2.取出涂片，空气中晾干10-15min。
3.入新配制好的油红O染色液，浸染15min。入60%异丙醇漂洗20-30s，流水冲洗，入蒸馏水稍微清洗。
4.入Mayer苏木素染色液，复染核2min。
5.入油红O缓冲液1min。
注意事项:
1.油红O染色液不够稳定，易产生沉淀，不宜提前配制。
2.Mayer苏木素染色液复染时间不能过长。
3.染色结果不能长期保存，应尽快观察及照相。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
2.Mayer苏木素染色液复染时间不能过长。
3.染色结果不能长期保存，应尽快观察及照相。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
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